穿刺部位正常采取左侧卧位，选取腰3、4间隙或者腰4、5间隙，或者是腰5、骶1间隙均可，成人脊髓末端平腰1锥体的下缘。进行腰椎穿刺时需要病人配合，病人宜采取弯腰抱膝位，后背和床面尽量垂直。穿刺针的进针深度大约4-6cm，当有两次突破感后，拨出针芯见脑脊液流出，之后再行测颅压，然后再留取脑脊液进行化验。